中圖共聚焦顯微鏡的原理與技術(shù)分析

　　原理：共聚焦系統(tǒng)的光源為離子激光器或HeNe激光器，光源發(fā)出的激光束通過(guò)照明針孔后成為點(diǎn)光源P。點(diǎn)光源P通過(guò)分束器進(jìn)入高數(shù)值孔徑顯微物鏡的成像系統(tǒng)成像后，在部分透明的被測(cè)樣品內(nèi)形成像點(diǎn)P。從像點(diǎn)P發(fā)出的散射光及反射光(波長(zhǎng)為λ1)和其他熒光(波長(zhǎng)λf>λ1),反方向經(jīng)過(guò)物鏡和分光鏡后，入射到單點(diǎn)探測(cè)器。單點(diǎn)探測(cè)器由探測(cè)器和放置在探測(cè)器前的針孔組成，它可以減少探測(cè)器的有效面積。探測(cè)器一般使用的是光電倍增管或雪崩光電二極管，探測(cè)器接收到的電信號(hào)最后由計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理。
 

　　顯微技術(shù)分析：一般熒光顯微鏡對(duì)于薄樣品可獲得清晰的圖像，但當(dāng)樣品較厚時(shí)，物平面之外的熒光分子也會(huì)被激發(fā)，而這些光在像平面上是彌散的，因而干擾成像質(zhì)量。20世紀(jì)50年代,Minsky發(fā)明了共聚焦顯微成像方法，但直到20世紀(jì)70年代，激光光源和計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展才使共聚焦技術(shù)真正得以實(shí)現(xiàn)。共聚焦的含義就是將聚焦平面以外的成像信息過(guò)濾，使其不在最終的成像結(jié)果中顯示，首先將光線(xiàn)聚焦于一點(diǎn)或一線(xiàn)，然后對(duì)所要觀察的平面進(jìn)行掃描，焦平面以外的光線(xiàn)通過(guò)檢測(cè)針孔隔離。